基于结构研究hPCAF各结构域的相互作用

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基于结构研究hPCAF各结构域的相互作用
论文目录
 
摘要第11-14页
Abstract第14-16页
第一章 前言第16-29页
  1.1 表观遗传学与组蛋白修饰第16页
  1.2 组蛋白乙酰化研究进展第16-20页
    1.2.1 组蛋白乙酰化转移酶第16-18页
    1.2.2 乙酰化修饰第18-20页
      1.2.2.1 乙酰化修饰与代谢第18-19页
      1.2.2.2 乙酰化修饰与疾病第19页
      1.2.2.3 乙酰化修饰与基因调控和细胞周期第19-20页
  1.3 GCN5研究进展第20-21页
    1.3.1 GCN5的发现第20-21页
    1.3.2 GCN5的结构第21页
  1.4 hPCAF研究进展第21-28页
    1.4.1 hPCAF第21-23页
    1.4.2 hPCAF的特性与功能第23-28页
      1.4.2.1 hPCAF的N端研究进展第23-24页
      1.4.2.2 hPCAF的HAT研究进展第24-27页
      1.4.2.3 hPCAF的C端研究进展第27-28页
  1.5 本论文的研究内容及意义第28-29页
第二章 材料与方法第29-56页
    2.1. 材料第29-37页
    2.1.1 基因第29页
    2.1.2 菌株和质粒第29-30页
    2.1.3 工具酶和抗体第30页
    2.1.4 药品和试剂第30-32页
    2.1.5 实验仪器和设备第32-34页
    2.1.6 材料配方第34-37页
      2.1.6.1 常用缓冲液配方第34-35页
      2.1.6.2 常用试剂配方第35-36页
      2.1.6.3 抗生素配方第36-37页
  2.2 实验方法第37-56页
      2.2.1. 质粒的构建第37-43页
      2.2.1.1 目的基因的获得第37-38页
      2.2.1.2 PCR产物的鉴定第38-39页
      2.2.1.3 PCR产物纯化第39-40页
      2.2.1.4 PCR产物双酶切处理和载体双酶切处理第40页
      2.2.1.5 目的基因和载体连接第40页
      2.2.1.6 连接产物的转化第40-41页
      2.2.1.7 质粒抽提第41-43页
      2.2.2. 定点突变第43-44页
    2.2.3 重组蛋白的表达第44-46页
        2.2.3.1. 表达载体第44-45页
        2.2.3.2. 乳糖操纵子系统第45页
        2.2.3.3. 重组蛋白表达第45-46页
    2.2.4 重组蛋白的纯化第46-48页
    2.2.5 重组蛋白的鉴定第48-50页
      2.2.5.1 SDS-PAGE第48-49页
      2.2.5.2 SDS-PAGE电泳原理第49-50页
      2.2.5.3 SDS-PAGE染色原理第50页
    2.2.6 Pull-down实验第50-51页
      2.2.6.1 pull down原理第50-51页
      2.2.6.2 pull down操作步骤第51页
    2.2.7 Western blotting (蛋白质免疫印迹)第51-52页
      2.2.7.1 Western blotting 原理第51页
      2.2.7.2 Western blotting 操作步骤第51-52页
    2.2.8 体外乙酰化反应第52页
    2.2.9 晶体生长第52-54页
      2.2.9.1 晶体生长原理与结晶方法第52-53页
      2.2.9.2 晶体的收集与保存第53页
      2.2.9.3 晶体的衍射与数据分析第53-54页
    2.2.10 核磁相关实验第54-56页
第三章 结果与讨论第56-77页
  3.1 实验蛋白样品的制备第56-65页
    3.1.1 hPCAF 415-658的制备第56-57页
    3.1.2 hPCAF HAT 493-658的制备第57-58页
    3.1.3 hPCAF 415-658 E570H的制备第58-60页
    3.1.4 野生型hPCAF 415-492的制备第60-61页
    3.1.5 Ac-hPCAF 415-492的制备第61页
    3.1.6 验证野生型hPCAF 415-492和Ac-hPCAF 415-492乙酰化信号第61-62页
    3.1.7 Importinα和importin β的制备第62-63页
    3.1.8 ~(15)N hPCAF 415-658的制备第63-64页
    3.1.9 ~(15)N hPCAF 493-658的制备第64页
    3.1.10 ~(15)N hPCAF 415-492的制备第64-65页
  3.2 hPCAF N端415-492与hPCAF HAT 493-658结构域的相互作用第65-68页
    3.2.1 hPCAF 415-658乙酰化活性的自我抑制第65-66页
    3.2.2 hPCAF 415-492区域维持hPCAF HAT正常构象第66页
    3.2.3 hPCAF 415-492与hPCAF 493-658的相互作用第66-67页
    3.2.4 hPCAF 415-658属于分子内自乙酰化第67-68页
  3.3 hPCAF自乙酰化功能的初探第68-70页
    3.3.1 hPCAF与入核受体的相互作用第68-69页
    3.3.2 hPCAF自乙酰化对415-492区域构象的影响第69-70页
  3.4 hPCAF 415-658蛋白晶体筛选与结构解析第70-74页
    3.4.1 晶体的筛选第70-73页
    3.4.2 晶体衍射结果第73-74页
  3.5 总结与讨论第74-77页
附录1 相关引物第77-78页
附录2 感受态细胞的制备第78-80页
参考文献第80-88页
致谢第88-89页

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