sST2双抗体夹心ELISA试剂盒的构建及其在心力衰竭中的应用

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sST2双抗体夹心ELISA试剂盒的构建及其在心力衰竭中的应用
论文目录
 
摘要第11-14页
Abstract第14-16页
第一章 前言第16-24页
  1. 常见的心衰标志物第16-19页
    1.1. B型利钠肽第16-17页
    1.2. 氨基末端B型利钠肽第17页
    1.3. 半乳糖凝集素3第17-18页
    1.4. 肌钙蛋白第18页
    1.5. 脂联素第18-19页
    1.6. 循环中的微小RNA (miRNA)第19页
  2. 新兴的心衰标志物sST2第19-21页
    2.1. sST2生物学特性第19页
    2.2. IL-3 3/ST2L通路第19-20页
    2.3. sST2临床意义第20-21页
    2.4. sST2作为心衰标志物的优势第21页
  3. 单克隆抗体技术第21-22页
  4. 酶联免疫分析技术第22页
  5. 研究的目的和意义第22页
  6. 研究内容与技术路线第22-24页
    6.1. 主要研究内容第22-23页
    6.2. 技术路线第23-24页
第二章 材料与方法第24-41页
  1. 材料第24-29页
    1.1. 主要仪器第24-25页
    1.2. 主要试剂和材料第25-27页
    1.3. 常用溶液和培养基的配置第27-29页
      1.3.1. 大肠杆菌LB培养基的配置第27页
      1.3.2. 碱裂解法质粒抽提液第27-28页
      1.3.3. 蛋白纯化常用溶液配置第28-29页
      1.3.4. RPMI-1640培养基的配置第29页
      1.3.5. ELISA试剂第29页
  2. 方法第29-41页
    2.1. 基因克隆的构建第29-32页
      2.1.1. PCR扩增反应第29-30页
      2.1.2. 小量质粒快速提取第30页
      2.1.3. 酶切方法第30-31页
    2.1.4 胶回收试剂盒回收片段第31页
      2.1.5. 目的片段与载体连接第31-32页
      2.1.6. 大肠杆菌感受态细胞的制备第32页
      2.1.7. 质粒DNA的转化第32页
    2.2. sST2蛋白表达及纯化第32-35页
      2.2.1. 重组蛋白的小量诱导表达第32-33页
      2.2.2. 重组蛋白的大量诱导表达第33页
      2.2.3. SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)第33-34页
      2.2.4. 蛋白质的纯化第34-35页
        2.2.4.1. 包涵体的洗涤纯化第34-35页
        2.2.4.2. 重组蛋白的Ni-Sepharose亲和层析纯化第35页
    2.3. 单克隆抗体的制备第35-38页
      2.3.1. 小鼠的常规基础免疫第35-36页
      2.3.2. 脾脏免疫第36页
      2.3.3. 细胞融合第36页
      2.3.4. 单克隆细胞的筛选第36-37页
      2.3.5. 单克隆细胞的扩大培养第37页
      2.3.6. 细胞冻存第37页
      2.3.7. 细胞复苏第37页
      2.3.8. 细胞换液第37页
      2.3.9. 细胞传代第37-38页
      2.3.10. 单克隆抗体的生产第38页
      2.3.11. 单克隆抗体的纯化第38页
    2.4. sST2 ELISA试剂盒的研发第38-40页
      2.4.1. 间接ELISA法第38-39页
      2.4.2. 单克隆抗体连接生物素第39页
      2.4.3. 双抗体夹心法ELISA反应步骤第39-40页
    2.5. 病例选择和统计分析第40-41页
第三章 结果与分析第41-62页
  1. sST2基因的克隆第41-44页
    1.1. 目的片段的扩增第41页
    1.2. sST2重组质粒的构建第41-43页
    1.3. sST2重组质粒转大肠杆菌DH5α第43页
    1.4. sST2重组质粒转大肠杆菌BL21第43-44页
  2. sST2蛋白的表达纯化第44-46页
    2.1. sST2全长蛋白的表达纯化第44页
    2.2. sST2 19-103片段蛋白的表达纯化第44-45页
    2.3. sST2 114-197片段蛋白的表达纯化第45-46页
    2.4. sST2 212-319片段蛋白的表达纯化第46页
  3. 蛋白浓缩和浓度的测定第46-47页
  4. sST2单克隆抗体的制备第47-49页
    4.1. 抗原免疫小鼠血清滴度的测定第47-48页
    4.2. sST2单克隆抗体的筛选第48页
    4.3. sST2单克隆抗体的效价评估第48-49页
  5. sST2单克隆抗体的亚型测定第49-51页
  6. sST2酶联免疫分析(ELISA)检测试剂盒的构建第51-55页
    6.1. 双抗体夹心法筛选sST2单克隆抗体配对第51-52页
    6.2. 不同反应体系的选择第52-53页
    6.3. 生物素标记抗体和SA-HRP工作浓度的选择第53-54页
    6.4. 标准曲线和线性范围的确定第54-55页
  7. 性能验证第55-58页
    7.1. 相关性比较第55-56页
    7.2. 回收率第56-57页
    7.3. 批内不精密度评价第57页
    7.4. 批间不精密度评价第57-58页
  8. sST2在心力衰竭中的诊断价值研究第58-59页
  9. sST2和NT-proBNP与肾功能相关性的研究第59-62页
    9.1. sST2和NT-proBNP与肌酐相关性第59-60页
    9.2. sST2和NT-proBNP与GFR相关性第60-61页
    9.3. 比较sST2和NT-proBNP在肾功能异常组和正常组血清水平的差异第61-62页
第四章 讨论第62-67页
  1. sST2抗原的制备第62-63页
  2. sST2单克隆抗体的制备第63-64页
  3. sST2双抗体夹心试剂盒的构建第64-65页
  4. sST2在心力衰竭中的应用价值第65-67页
第五章 结论第67-68页
参考文献第68-81页
致谢第81页

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