以肠道病毒71型3C~(pro)及柯萨奇B3型3D~(pol)结构为基础的药物开发

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以肠道病毒71型3C~(pro)及柯萨奇B3型3D~(pol)结构为基础的药物开发
论文目录
 
摘要第1-6页
Abstract第6-16页
1 前言第16-41页
  1.1 手足口病概述第16-18页
    1.1.1 手足口病的简介第16-17页
    1.1.2 手足口病的传播与流行第17页
    1.1.3 手足口病的病原学特征第17-18页
    1.1.4 手足口病的预防与治疗第18页
  1.2 肠道病毒71型(EV71)第18-22页
    1.2.1 肠道病毒71型简介第18-19页
    1.2.2 EV71基因组结构第19-20页
    1.2.3 EV71病毒颗粒结构第20-21页
    1.2.4 EV71的生活史第21-22页
  1.3 EV71 3C蛋白酶第22-28页
    1.3.1 3C蛋白酶简介第22-26页
    1.3.2 3C蛋白酶的作用第26页
    1.3.3 3C蛋白酶抑制剂的研究进展第26-28页
  1.4 柯萨奇病毒B3型(CVB3)第28-32页
    1.4.1 柯萨奇病毒B3型简介第28-30页
    1.4.2 CVB3基因组和病毒颗粒结构第30-31页
    1.4.3 CVB3致病机理和研究进展第31-32页
    1.5. CVB3 3D聚合酶第32-36页
    1.5.1 3D聚合酶简介第32-34页
    1.5.2 3D聚合酶起始与延伸第34-36页
    1.5.3 CVB3 3D聚合酶抑制剂的研究进展第36页
  1.6 结构生物学概述第36-37页
  1.7 蛋白质的结晶第37-38页
    1.7.1 蛋白质的结晶方法第37-38页
    1.7.2 影响蛋白晶体的因素第38页
  1.8 基于片段的药物发现技术第38-39页
  1.9 课题的研究意义第39-41页
    1.9.1 EV71 3C蛋白酶药物研究的意义第39-40页
    1.9.2 CVB3 3D~(pol)药物研究的意义第40-41页
2 材料与方法第41-58页
  2.1 实验材料第41-43页
    2.1.1 质粒与菌株第41页
    2.1.2 实验试剂第41-42页
    2.1.3 主要仪器第42-43页
  2.2 常用试剂的配制第43-48页
    2.2.1 培养基及细菌培养相关溶液的配制第43-45页
    2.2.2 分子克隆相关试剂的配制第45页
    2.2.3 琼脂糖凝胶电泳相关试剂的配制第45页
    2.2.4 SDS-PAGE相关溶液的配制第45-47页
    2.2.5 重组蛋白纯化相关试剂第47-48页
      2.2.5.1 EV71 3C蛋白酶纯化相关试剂第47-48页
      2.2.5.2 CVB3 3D~(pol)纯化相关试剂第48页
  2.3 实验方法第48-58页
    2.3.1 重组蛋白表达质粒的构建第48-52页
      2.3.1.1 大肠杆菌超级感受态的制备第48-49页
      2.3.1.2 转化第49页
      2.3.1.3 目的基因的获取第49页
      2.3.1.4 引物设计第49-50页
      2.3.1.5 目的片段的扩增及回收第50-51页
      2.3.1.6 原核表达载体的制备第51页
      2.3.1.7 双酶切载体第51页
      2.3.1.8 目的片段与酶切载体连接第51-52页
    2.3.2 重组蛋白的表达第52-53页
      2.3.2.1 重组蛋白表达条件的摸索第52-53页
      2.3.2.2 目的蛋白的SDS-PAGE电泳检测第53页
      2.3.2.3 重组蛋白的大量表达第53页
    2.3.3 EV71 3C蛋白酶的纯化第53-55页
      2.3.3.1 Ni-NTA亲和柱层析第53-54页
      2.3.3.2 脱盐柱置换缓冲液第54-55页
      2.3.3.3 离子交换柱层析第55页
    2.3.4 CVB3 3D聚合酶的纯化第55-56页
      2.3.4.1 Ni-NTA亲和柱层析第55页
      2.3.4.2 凝胶过滤柱层析第55-56页
    2.3.5 重组蛋白的结晶第56-58页
      2.3.5.1 结晶条件的初筛第56页
      2.3.5.2 结晶条件的优化第56页
      2.3.5.3 获得复合物晶体第56-57页
      2.3.5.4 衍射数据的收集和处理第57页
      2.3.5.5 结构解析第57-58页
3 结果分析与讨论第58-80页
  3.1 EV713C蛋白酶的药物筛选第58-68页
    3.1.1 EV71 3C蛋白酶的表达与纯化第58-60页
    3.1.2 3C蛋白酶的结晶第60-62页
    3.1.3 3C蛋白酶与小分子晶体复合物的获得第62-63页
    3.1.4 衍射数据的收集和结构解析第63-65页
    3.1.5 3C蛋白酶晶体与小分子复合物的结构第65-67页
    3.1.6 讨论与总结第67-68页
  3.2 柯萨奇病毒B3型3D~(pol)的结构生物学研究第68-80页
    3.2.1 CVB3 3Dpol的表达与纯化第68-74页
    3.2.2 CVB3 3Dpol的结晶第74-76页
    3.2.3 衍射数据的收集和结构解析第76-78页
    3.2.4 讨论与总结第78-80页
参考文献第80-90页
致谢第90页

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