旋毛虫IFN-γ诱导的溶酶体硫醇还原酶特性研究

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旋毛虫IFN-γ诱导的溶酶体硫醇还原酶特性研究
论文目录
 
摘要第1-11页
ABSTRACT第11-14页
绪论第14-15页
第一篇 文献综述第15-41页
第一章 旋毛虫介绍第15-23页
1 旋毛虫的形态第15页
2 旋毛虫的生活史第15-16页
3 旋毛虫与宿主相互作用第16-19页
  3.1 入侵肠上皮细胞过程中ES作用第16页
  3.2 ES在肌肉细胞转变过程中的作用第16-17页
  3.3 ES在免疫应答中的作用第17页
  3.4 ES与抗原呈递细胞第17-18页
  3.5 ES对T细胞分化的作用第18-19页
参考文献第19-23页
第二章 RNA干扰技术的简介第23-31页
1 RNAi的发展第23页
2 RNAi原理第23-24页
3 RNAi生物学功能第24页
4 RNAi技术的主要方法第24-25页
  4.1 化学合成siRNA物理传递第24页
  4.2 体外逆转录dsRNA物理传递第24-25页
  4.3 构建非病毒shRNA质粒表达载体传递第25页
  4.4 构建病毒载体传递第25页
5 RNAi技术的应用第25-27页
  5.1 在医学方面的应用第25-26页
  5.2 基因敲减和功能基因组学运用第26页
  5.3 RNAi在寄生虫的应用第26-27页
参考文献第27-31页
第三章 IFN-γ诱导的溶酶体内的硫醇还原酶(GILT)的研究进展第31-41页
1 GILT的发现第31页
2 GILT的分子结构生物学特性第31-32页
3 GILT的主要功能第32-35页
  3.1 GILT在抗原呈递中的作用第32-33页
  3.2 GILT调节活性氧状态第33页
  3.3 GILT促进细菌溶红血球素活性第33-35页
4 研究进展第35-37页
  4.1 抗肿瘤免疫中的作用第35页
  4.2 抗病毒免疫应答第35-36页
  4.3 GILT在其他物种中研究第36-37页
参考文献第37-41页
第二篇 试验研究第41-107页
第四章 旋毛虫分泌蛋白的预测和功能分析第41-55页
1 材料与方法第41-43页
  1.1 旋毛虫蛋白组数据来源和软件第41-42页
  1.2 旋毛虫分泌蛋白的预测标准第42页
  1.3 旋毛虫分泌蛋白预测分析第42-43页
  1.4 旋毛虫分泌蛋白分析第43页
2 结果第43-48页
  2.1 旋毛虫分泌蛋白特征分析第43-47页
  2.2 分泌蛋白功能注释第47-48页
3 讨论第48-51页
参考文献第51-55页
第五章 旋毛虫IFN-γ诱导的溶酶体硫醇还原酶(GILT)基因克隆与表达第55-79页
1 材料第56-59页
  1.1 虫株及试验动物第56页
  1.2 质粒、菌株及主要试验试剂第56页
  1.3 试验有关溶液配置方法第56-58页
  1.4 主要仪器设备第58-59页
2 方法第59-65页
  2.1 旋毛虫肌肉幼虫收集第59页
  2.2 旋毛虫肌肉幼虫虫体RNA提取第59页
  2.3 旋毛虫肌肉幼虫cDNA合成第59-60页
  2.4 引物设计与序列分析第60页
  2.5 Tsp-GILT基因扩增第60-61页
  2.6 pMD19T-Tsp-GILT重组质粒构建第61-62页
  2.7 pET 32a-Tsp-GILT重组表达载体的构建第62-63页
  2.8 pET 32a-Tsp-GILT重组载体的表达及分布鉴定第63页
  2.9 重组蛋白纯化和复性第63-64页
  2.10 Tsp-GILT重组蛋白的体外酶活鉴定第64页
  2.11 Western Blot分析及免疫荧光第64-65页
3 结果第65-73页
  3.1 扩增与序列分析第65-69页
  3.2 蛋白表达、纯化以及免疫原性检验第69-72页
  3.3 重组蛋白的体外酶活试验第72页
  3.4 免疫荧光实验第72-73页
4 讨论第73-75页
参考文献第75-79页
第六章 siRNA介导的旋毛虫IFN-γ诱导的溶酶体硫醇还原酶基因干扰表达后的功能研究第79-95页
1 材料第80页
  1.1 虫株及试验动物第80页
  1.2 主要试剂第80页
  1.3 仪器设备第80页
2 方法第80-84页
  2.1 旋毛虫各阶段虫体的收集及培养第80-81页
  2.2 旋毛虫各阶段虫体Total RNA提取及cDNA合成第81页
  2.3 荧光定量引物设计与扩增效率检验第81-82页
  2.4 荧光定量检验Tsp-GILT在虫体三个阶段的表达水平第82页
  2.5 Mice-IFN-γ刺激体外培养的NBL第82页
  2.6 siRNA介导的GILT基因沉默试验第82-83页
  2.7 GILT基因表达抑制后虫体各生命活动的变化第83-84页
3 结果第84-90页
  3.1 荧光定量引物扩增效率评价第84-85页
  3.2 不同阶段虫体Tsp-GILT表达情况第85-86页
  3.3 小鼠IFN-γ刺激体外培养NBL后Tsp-GILT表达量的变化第86页
  3.4 转染效果检验和不同siRNA对Tsp-GILT干扰效率比较第86-88页
  3.5 RNAi干扰后对旋毛虫虫体生命活动的影响第88-90页
4 讨论第90-92页
参考文献第92-95页
第七章 旋毛虫GILT重组蛋白免疫保护性研究第95-107页
1 材料第95-96页
  1.1 旋毛虫虫株与试验动物第95页
  1.2 主要试剂第95页
  1.3 主要仪器第95-96页
2 方法第96-97页
  2.1 免疫程序第96页
  2.2 试验分组第96页
  2.3 血清收集第96页
  2.4 Western blot检测特异性抗体第96页
  2.5 ELISA检测特异性抗体的变化第96-97页
  2.6 ELISA检测细胞因子变化第97页
  2.7 旋毛虫肌肉幼虫的收集与计数第97页
3 结果第97-103页
  3.1 Western blot检测免疫后特异性抗体第97-98页
  3.2 ELI SA检测抗体变化第98-99页
  3.3 小鼠血清IFN-γ变化第99页
  3.4 小鼠血清IL-2变化第99-100页
  3.5 IL-4变化第100页
  3.6 IL-10变化第100-101页
  3.7 IL-17变化第101页
  3.8 TGF-β1变化第101-102页
  3.9 各组肌肉幼虫数量比较第102-103页
4 讨论第103-105页
参考文献第105-107页
结论与展望第107-109页
附表A第109-110页
附表B第110-111页
致谢第111-113页
个人简历第113页

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